胚胎干细胞来源视网膜色素上皮细胞和感光细胞
(Embryonic Stem Cell-derived
Retinal Pigment Epithelium and Photoreceptor Cells)
早期 - 临时视力下降
中期 - 物体的线部分看上去像波浪线,继续发展下去看不见物体的中心,文字出现空白或看上去中心被擦去
晚期 - 失明
基础研究 | 非临床 | 1期 | 2期 | 3期 | 许可 |
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观察到ZO1、Mitf、Pax6、 Bestrophin及RPE65等RPE细胞的特异性蛋白质,可验证已分化为RPE细胞。
Mitf/ZO1
Pax6/ZO1
Bestrophin/DAPI
RPE65/DAPI
为观察RPE细胞的主要机能之一噬菌体作用,用荧光剂将乳胶小珠(FITC-labeled latex beads)和感光细胞外段(FITC-labeled photoreceptor outer segment)处理到分化的RPE细胞。其结果,观察到荧光剂进入了RPE细胞内部。借此可以得知,分化的RPE细胞起到了噬菌体作用。
ZO1/FITC-labeled latex beads
apical
nuclei
basal
ZO1/FITC-labeled photoreceptor outer segments
用电子显微镜验证分化的RPE细胞形态的结果,观察到了噬菌体作用相关的RPE细胞典型结构体吞噬体(Phagosome,A)、细胞间相互作用相关的紧密结合(Tight junction,A*)、色素沉淀相关的黑色素粒(Melanin granule,A**)和用于噬菌体作用的微绒毛(Microvilli,B)等。
观察到分化的RPE细胞分泌的PEDF和VEGF(典型RPE细胞分泌的成长因子)和阳性对照组(成体RPE细胞株)差不多。
观察到了Photoreceptor特异性的蛋白质blue opsin、red opsin、PDE6b、recoverin和rhodopsin,以此可以判断分化成Photoreceptor。
当Photoreceptor经过光传输信号时,明视觉(Photopic vision)Cylic GMP(Guanosine Monophosphate)浓度下降,比暗视觉(Scotopic vision)严重。实验结果,cylic GMP在明视觉(light)的减少比暗视觉(dark)严重,验证了分化的photorecepto机能。
给黄斑变性模型动物移植两种TED-R细胞时,曾因黄斑变性导致变薄的外核层(ONL,Outer Nuclear Layer)厚度相比对照组有所改善。
给黄斑变性模型动物移植两种TED-R细胞时,曾因黄斑变性导致减少的视网膜电图B波(b-wave)高于对照组,以此可以确认视觉能有所改善。