R & D

胚芽干细胞细胞治疗剂

原因

为了受损脊椎组织的再生,包括药物治疗与手术疗法在内,最近进行了多种成体干细胞治疗法,但已有的疗法效果不佳,而且发生严重的副作用,从根本上是无法再生神经组织。还有,最近进行了利用胚芽及逆分解干细胞的治疗,但因为形成肿瘤等的安全性问题,现实上难以适用。

过程

从胚芽及逆分化干细胞分化的神经前体细胞,再分化为神经细胞和神经脊细胞。再分化之前的神经前体细胞全部移植到脊髓组织及脑组织时,组织内形成中胚层肿瘤。作为区分这些的因子,利用称之为PSA-NCAM的蛋白质,神经前体细胞可分离为两种细胞。其中, PSA-NCAM阳性细胞是再次分化为神经组织的神经细胞,PSA-NCAM阴性细胞是分化为中胚层组织的神经脊细胞。在分离的神经前体细胞中,只选别PSA-NCAM阳性细胞,移植到受损的脊髓及脑组织时,可导致神经组织的再生。

结果

试验资料
– 纯粹分离的PSA-NCAM 阳性神经前体细胞。

-利用PSA-NCAM Marker 分离神经前体细胞
利用PSA-NCAM Marker分离这些。

– 移植分离的神经前体细胞
利用PSA-NCAM Marker,各移植分离的阳性及阴性细胞时,可确认只有移植阴性细胞时,才能形成中胚层肿瘤。

胚芽干细胞相关实验 → 脊髓损伤

实验

– 改善脊髓损伤模型的运动功能
每个星期进行制作脊髓损伤动物模型一个星期后,移植PSA-NCAM阳性神经前体细胞,然后最长10个星期观察运动功能变化推移的行动评价(Basso,Beatie,Bresnahan, BBB)实验。

结果

抑制细胞的群组和control相比,运动功能得到改善(BBB score增加),移植后大约从4个星期开始和control相比出现统计学上面明显的增加。

1) 抗炎症(Anti-inflammation)

试验

向脊髓受损模型抑制细胞,在10天后提取脊髓组织,分析妨碍组织再生的炎症。为了确认细胞移植治疗效果中有无抗炎症效果,脊髓内存在的小神经胶质细胞microglia和因为炎症而活性化的activated microglia用无法标注的抗体Iba1, ED1进行双重染色,分析组织里面剩余的activated microglia的比率。

结果

抑制细胞的组织和control相比,统计学上activated microglia明显减少,这意味着细胞移植具有减少炎症的效果。

2) 新生血管(Angiogenesis)

试验

作为细胞生存最重要的因素之一血管的指标,使用smooth muscle actin(SMA)抗体,用免疫组织化学(IHC)方法进行了确认。

结果

和放入media的control群组相比,移植细胞的群组的组织观察到了更多的血管,而且在统计学方面出现了明显的结果。

3) 脊髓内的细胞增殖 (Cell proliferation)

脊髓内的细胞增殖 (Cell proliferation)

制成脊髓损伤模型后,一个星期后移植细胞,每天注射BrdU,一共注射7天,第八天提取技术组织,比较分析了移植Control和细胞的群组的BrdU+ 细胞个数。

结果

移植细胞的组织和control相比,统计学上确认到明显的新细胞增加。因此可以证明细胞移植可以使脊髓损伤等动物的脊髓内耐性细胞的增殖增加。